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PRODUCTS CENTER

產品中心

當前位置:首頁產品中心科研細胞原代細胞角膜成纖維細胞
角膜成纖維細胞

產品簡介

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組織肉毒堿棕櫚酰轉移(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE)活性比色法定量檢測試劑盒

產品廠地:上海市
更新時間:2025-02-20
廠商性質:經銷商
訪問量:405
詳細介紹在線留言
品牌其他品牌貨號GOY-01X1095
規格5×10?Cells/T25培養瓶供貨周期現貨
主要用途產品僅供科研使用應用領域化工

冷凍保存細胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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產品屬性:   

產品名稱

規格

貨號

角膜成纖維細胞

5×10?Cells/T25培養瓶

GOY-01X1095

商品介紹:

名稱    角膜成纖維細胞   

2.組織來源:眼角膜組織

3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介:

角膜成纖維細胞分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部最薄。角膜有十分敏感的神經末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明,角膜并沒有血管,透過外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的角膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。角膜成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括:構造和維持角膜的正常形態,合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

5.方法簡介:

實驗室分離的人角膜成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的人角膜成纖維細胞Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基含FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

產品貨號CM-H131

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態成纖維細胞樣

傳代特性可傳5代左右;3代以內狀態最佳

消化液0.25%胰蛋白酶

培養條件氣相:空氣,95%CO25%

 

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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角膜成纖維細胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Beta-microseminoprotein

0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Transcription factor 21

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Hypoxia-inducible factor 1-alpha

0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats

葡萄糖銨 英文名稱: 產品規格:20支

0.47-30 ng/mL 人DnaJ同系物亞科B成員3(DNAJB3)ELISA試劑盒

抗生素檢定培養基6號(7.8-8.0) 英文名稱:Antibiotic Agar No.6 產品規格:250g

39-2500 pg/mL 人殺菌性通透性增加蛋白(BPI)ELISA試劑盒

15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Troponin T, cardiac muscle

0.156-10 ng/mL 人瞬態電壓感受器陽離子通道亞科V成員1(TrpV1)ELISA試劑盒

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