細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

小鼠原代輸尿管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代輸尿管平滑肌細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代輸尿管平滑肌細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于小鼠原代輸尿管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

GLUT3(Glucose transporter 3 0.5mgGLUT3(Glucose transporter 3) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗原

CD247 Protein Human 重組人 CD247 / CD3-ZETA 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CDH15重組大鼠 Cadherin-15 / CDH15 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CCL8 Protein Mouse 重組小鼠 CCL8 / MCP-2 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

RHOA重組人 RhoA 蛋白 Protein

大鼠多巴胺(DA)試劑盒 ，英文名： DA ELISA Kit

Porcine heat shock protein 90 (HSP-90) ELISA Kit 豬熱休克蛋白90(HSP-90)試劑盒

馬特定基因序列(Hor)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforLTC4(MouseLeukoieneC4)ELISAKit小鼠白三烯C4

體液總巰基含量熒光定量試劑盒20次

ELISAKitADM雞腎上腺髓質(zhì)素

小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒   小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒、小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠致癌基因相關(guān)蛋白試劑盒   小鼠致癌基因相關(guān)蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠致癌基因相關(guān)蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠致癌基因相關(guān)蛋白試劑盒、小鼠致癌基因相關(guān)蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠脂聯(lián)素試劑盒   小鼠脂聯(lián)素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠脂聯(lián)素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠脂聯(lián)素試劑盒、小鼠脂聯(lián)素試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠脂蛋白試劑盒   小鼠脂蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠脂蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠脂蛋白試劑盒、小鼠脂蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠氧還原蛋白過氧化物酶4(PRDX4)試劑盒 96T/48T

Hypoxia inducible factor 1 alpha (HIF-1 alpha) ELISA Kit 大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)試劑盒

Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor15-LO/LOX(Mouse15-lipoxygenase)ELISAKit小鼠15脂加氧酶

飲料比色法定量試劑盒20次

MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)試劑盒規(guī)格：96T/48T

癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)）

piwi樣2蛋白抗體

小鼠原代輸尿管平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基CDH15重組大鼠 Cadherin-15 / CDH15 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

GLUT3(Glucose transporter 3 0.5mgGLUT3(Glucose transporter 3) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗原

RHOA重組人 RhoA 蛋白 Protein

CD247 Protein Human 重組人 CD247 / CD3-ZETA 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CCL8 Protein Mouse 重組小鼠 CCL8 / MCP-2 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。